一、鲎试剂灵敏度的复核

为了保证检查细菌内毒素结果的准确性，用于实验的鲎试剂应首先核对灵敏度。因为实际工作中，发现鲎试剂均符合药典规定标准前提下，由于生产厂家不同，部分鲎试剂的实测灵敏度与标示值有差异而导致检测同一检品时，用相同标示值的鲎试剂，出现不同结果。鲎试剂灵敏度的复核是使用该鲎试剂的前提。中国药典(2000版)在灵敏度复核项下规定,只有当实测值λc在0.5λ~2.0λ(包括0.5λ和2.0λ)时，方可用于细菌内毒素检查，并以λ为该批试剂的灵敏度，同时要求所用鲎试剂的灵敏度须小于供试品的内毒素限值，因此灵敏度的准确与否直接关系到判断结果的正误，应尽量选用测定值与标示值一致(λc =λb)的鲎试剂。有报道，用符合药典规定的灵敏度标示值相同的鲎试剂检测同一检品，结果因鲎试剂实测值与标示值间存在差异而出现了两种*不同的结果。因而先核对灵敏度可避免因鲎试剂本身造成的判断失误。

二、供试品的稀释

在取样品时，要熟悉中国药典的内容，不能直接取大输液原液0.1ml进行检查，这是排除干扰因素的简单有效的方法。因药典已明确规定实验中鲎试剂的灵敏度不超过0.5EU/ml，根据供试品的稀释公式:

供试品稀释倍数=L/λ

L:供试品的内毒素*

λ:鲎试剂灵敏度的标示值(EU/ml)。

故检测大输液均应稀释后才能进行实验，如选用更高灵敏度的鲎试剂，则应增加样品的稀释倍数。稀释用的细菌内毒素检查用水药典作了规定。在4h内不得与鲎试剂产生凝集反应。如果直接用供试品原液实验，就会使供试品的内毒素要求提高到0.5EU/ml或0.5EU/ml 以下，这样，根据目前大输液的生产和贮藏条件，有些就会达不到，鲎法检出的阳性率会提高，兔法复核的机遇也将增多，势必会浪费人力物力。

以前细菌内毒素的限值是按照热原检查法所需的家兔剂量计算的，由于家兔剂量往往高于人用最大剂量的几倍甚至几十倍，势必造成对产品内毒素要求过于严格，使很多合格产品被判为不合格产品或使药品生产成本增加，所以在USP和EP中，相继采用人用最大剂量来计算药品细菌内毒素的限值。如注射用头孢噻肟钠按中国药典(1995版)规定的热原剂量计算其细菌内毒素限值，与USP的限值要求相差4倍，而用最大剂量计算则两者十分接近。

三、混合液的pH值

供试液与益试剂混合液的pH值对鲎实验的影响较大，根据国内外资料的报道，实验的最适pH为6.25~7.25才能形成最佳凝胶。鲎试剂本身具有一定的缓冲能力。但pH值过大或过小均可抑制鲎试剂与细菌内毒素的反应，其原因可能是pH值过大或过小均可破坏极微量的内毒素。

四、保温温度

温度对鲎试剂的灵敏度影响很大，保温温度在25~40℃之间，随着温度的升高，鲎试剂的灵敏度亦增大，在40~46℃之间，温度对益试剂的灵敏度无明显影响，达到49℃或更高温度时，则会破坏鲎试剂。故应严格按照药典的要求，温度控制在(37士1)℃之间，才可获得理想的结果。

五、振动的影响

鲎试剂与细菌内毒素形成的凝胶受到振动后易变形而误判为阴性。因此，在鲎实验过程中，不宜进行容易引起试管振动的实验操作，实验用的试管架的眼孔直径应与安瓿或试管直径相接近，避免安瓿或试管左右晃动。水浴箱要放置在固定不易受到振动的地方，保温过程中不可随时取出观察。

六、所用器皿的影响

所用器皿均应*洗净和灭菌，实验用器皿均应充分洗涤并冲洗干净，特别是接触酸碱或用洗衣粉、洗液等洗涤后，更应冲洗干净，以免残留物破坏极微量的内毒素。灭菌应按药典中的有关方法处理，防止引入外源性内毒素。如有条件的话可用合格的细菌内毒素快检盒。

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本文节选自：《细菌内毒素检测中问题的研究》，文章作者：岳丽娜。如有侵权，请联系删除，谢谢！