1、制备采血的鲎要新鲜或用经人工养殖几天后的健康鲎,采血时血流必须通畅。采血量大,试剂质量也高,但不同季节鲎血的质量也有差异。
2、在制备TL的全过程中均须无菌操作,动作应轻,以防止细胞破裂。使用器具均须清洗干净并去热原。作者曾对器具做硅化与不硅化处理的比较,其结果发现器具硅化与否不影响灵敏度。因此,只要器具干净并已去热原即可以不硅化。
3、在抗凝剂方面,作者使用的茶碱量较大,观察发现其细胞形态均正常,在采血瓶中分散均匀,且发生聚集的时间后移。之后再用抗凝剂2洗1次,有利于将血蓝蛋白除去。除茶碱外,其他抗凝剂是否也可加大用量尚需探索。
4、氯化钠一般用来配制抗凝剂与洗脱液,常用2.95%~3%的氯化钠溶液,其浓度与海水浓度相当。作者曾观察4%浓度的氯化钠溶液对变形细胞的影响,随着观察时间的延长,3%浓度的氯化钠溶液中的变形细胞逐渐破裂溶解,并在洗涤中形成小块,而4%的氯化钠溶液中的细胞仍然均匀分散。作者对两种不同浓度氯化钠制品的质量尚未进行深入的比较。
5、关于重组鲎试剂:PyroSmart NextGenTM(PSNG)重组鲎试剂是一种基因工程合成的细菌内毒素定量检测试剂,PSNG鲎试剂完-全模拟了天然鲎试剂LAL的酶联反应,包含重组C因子、重组B因子、重组凝固酶原,且剔除了容易引起假阳性的G因子,不依赖鲎血,满足可持续发展的目标,可以应用动态显色法进行测试和分析。
PSNG是一种灵敏而灵活的试剂,可用于USP、JP的细菌内毒素测试章节进行动态显色法细菌内毒检测,不需要更换方法和设备,操作简便易行。
在PyrosKinetix®Flex细菌内毒素定量检测系统及酶标仪上,PSNG和样品可以按照50微升:200微升的比例使用,极大的节约试剂消耗。
【重组鲎试剂优势】
检测便利:不需要更换方法和设备
快速高效:完成实验仅需(10-30)分钟
节约试剂:鲎试剂使用量仅需50微升
灵敏度高:灵敏度可达0.001EU/mL,实际可达0.0005EU/mL
特异性:PSNG不与(1,3)-β-D-葡聚糖发生反应,杜绝了假阳性结果。
药典法规护航:USP、EP、JP、ChP药典法规收录