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鲎试验法在检测前时应做什么?

发布时间: 2022-10-19  点击次数: 108次

鲎试验法(鲎变形细胞溶解物试验)是第一个被美国作为检测细菌内毒素的法定方法的,美国还将此法纳入了美国药典第20版(1980)中,并对该法进行了非常详尽的介绍。慢慢地,也有许多国家也将鲎试验法作为检测细菌内毒素的法定方法。现在就以美国为例子,来详细阐明鲎试验法。

 


美国食品药品管理局(FDA)有这样一条准则,即只要是给人类使用的药品、生物制剂、医疗器械等产品最后一定要使用鲎试验法进行细菌内毒素检测,只有检测过关的产品才能得到美国食品药品管理局的承认。

 

那鲎试验法作为检测细菌内毒素的法定方法,在进行试验检测前应该做些什么呢?

 

首先,需要对鲎试剂的灵敏度进行检测。

 

不同的实验室对鲎试剂的操作肯定会出现不同的差异,所以检测人员在进行检测前必须要对同一批次的鲎试剂以及同一批次的内毒素作稀释度试验。一般来说只需要4~8个批次试验即可,然后再以2倍的倍比稀释来选取终点范围值作鲎试验法。

 

终点的细菌内毒素含量用ng/ml进行表示,接着将其换算成log值,最后再来计算标准差,即SD值。如果出现了4个批次的稀释度的标准差值都小于或者等于标准差值99%的限度值,那么该方法是可以进行使用的。但是,如果标准差值有8个稀释度的标准差超过99%的上限值,那么该方法就会因为变异较大而不能使用,必须要在重新试验前找出不可用的原因再进行纠正。

 

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假如实验室最终通过了上面出现异常的变异试验,接下来就应该按照一系列浓度的参考标准内毒素(RSE)或对照标准内毒素(CSE)来检测鲎试剂的灵敏度,若最终鲎试剂的灵敏度差异没有超过标定值的2倍稀释,那最终鲎试剂的灵敏度是可行的。

 

其次,要对鲎试剂进行抑制与增强试验。

 

将一种药物与水中的一系列同种内毒素浓度进行比较,其中该药物含有不同的标准内毒素(灵敏度以鲎试剂标定),待检测结果出来后,再比较标准系列的内毒素检测结果和药物中的内毒素检测量,如果两者的差异结果没有超过2倍的稀释浓度,则认为该药物有抑制或增强现象。

 

要注意的是,如果该药物成分较为恒定,则在检测时只需检测该药物的最高和最-低浓度就可以了,但是如果药物的浓度都有抑制或者增强的作用,就必须每一种浓度都要进行抑制或增强试验。所有法定的药物检测都必须在没有稀释或在适当稀释后再进行检测,且稀释倍数不能超过最大有效稀释倍数,否则其中的内毒素经稀释后将会出现浓度过低而不被鲎试验法检出的现象。

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