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凝胶法常用方法之试管法

发布时间: 2022-10-20  点击次数: 131次

在凝胶法中,经常使用的方法就包括试管法。

 

那在凝胶法中,试管法的使用方法是怎么样的呢?

 

首先需要把供试品和鲎试剂等量加入试管中,轻摇晃使其充分混匀,再将该试管置于水浴中静置,取出后再观察该试管的凝胶是否形成。试验时,需要作试验管、阳性对照管、阴性对照管及阴性抑制对照管共4种,来作对照试验。

 


1.试验管

 

需要取出0.1ml的样本和0.1ml的鲎试剂。水、注射液等一般样本在试验前是不需要进行处理的,但是如果血液、腹腔渗出液等其他液体就必须在试验前就进行处理,因为这些样本可能存在鲎试验法反应的抑制物。所用的鲎试剂需要在试验前就对其以标准内毒素进行校准,且是可以进行试验的。

 

2.阳性对照管

 

分别取出0.1ml的标准内毒素和0.1ml的鲎试剂,在使用标准内毒素是应以WHO标准品进行校准标定。在实验中应用的内毒素浓度需要根据鲎试剂的灵敏度来确定,一般来说,范围在15 ng/ ml即可。

 

3.阴性对照管

 

只需取0.1ml的无热原水和0.1ml的鲎试剂即可。

 

4.抑制对照管

 

需要取0.1ml的供试品和0.1ml的标准内毒素和0.2ml的鲎试剂。

 

上述四管均放入37℃孵育1~2小时观察结果。如形成凝胶坚固,试管倒转180度不变形,则记为(++);如混浊度和粘滞性明显增加,呈胶体状,但倾斜试管时变形,则记为(+);如液体流动自如,透明无变化或稍混浊,有少量颗粒细絮片状物,则记为(-)。

 

 

以上对照的4支试管需要在37℃的环境中静置1~2个小时,再对试管进行观察,以此来得出结果。如果试管中形成的凝胶是凝固的,且将试管翻转180度都不会变形时,则该试管被记为(++);但是如果试管出现了混浊的情况而且试管内还有粘滞性的情况,整体是呈胶体状的,将试管倾斜时液体也会呈倾斜,则记为(+),如果整个试管的液体是非常流动的,且试管内部呈透明色或者只有轻微混浊,且出现了些许颗粒细絮物,则记为(-)。

 

 

如果供试品中出现了抑制物,可以把供试品进行处理,比如将其进行稀释,或者用其他方法将抑制物清除,再重新进行检测。如果这些方法都没有效果的话,还可以采取其他细菌内毒素检测方法,比如家兔法(Rabbit pyrogen test)。


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