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内毒素检测时,血液前处理方法的注意点有哪些?

发布时间: 2022-12-07  点击次数: 121次

1、在进行血中内毒素测定时,要注意选择方法和试剂。

 

2血浆或血清制备

作为临床上常用样本主要为血浆,其使用率占95%以上,因此作为体液主要部分血浆的制备就显得十分重要。据Das报道内毒素一般除了游离状态外还大量附着在血小板上因此用含有大量血小板的血浆作为样品更为合适。在制备人血浆或动物血浆时,目前国外为了防止细胞的破坏多采用低温分离,使用含有大量血小板的血浆样品,即在41000gx10分钟分离条件或在无低温离心机时用3000gx40秒分离条件。切不可在常温下进行高速、长时间分离另外在分离血浆或血清时要避免细菌的污染。

 

血清的制备用不加抗凝剂的注射器采血转入离心管中,在冰水浴中放置30分钟4条件下、1000xg10分钟进行离心分离血清。

 

血浆或血清分离后若暂时不用,可在-80℃冰冻保存,并在1个月以内使用。注意为了避免吸附内毒素请使用玻璃制试管保存。

 

 

3抗凝剂种类及影响

在制备血浆时由于加入一定的抗凝剂,因此抗凝剂的种类和加入量对于回收率都有很大的影响,一般常用抗凝剂主要有肝素枸橼酸钠及EDTA其中以肝素的使用最多。然而我们知道大量的肝素会对内毒素反应有干扰作用尤其对稀释加热法和氯仿提取法将使回收率下降而对PCA法影响较少因此在制备血浆时肝素的加放量只需2~5μl/ml即可。

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