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1、在进行血中内毒素测定时,要注意选择方法和试剂。
2、血浆或血清制备
作为临床上常用样本主要为血浆,其使用率占95%以上,因此作为体液主要部分血浆的制备就显得十分重要。据Das报道:内毒素一般除了游离状态外,还大量附着在血小板上,因此用含有大量血小板的血浆作为样品更为合适。在制备人血浆或动物血浆时,目前国外为了防止细胞的破坏多采用低温分离,使用含有大量血小板的血浆样品,即在4℃1000gx10分钟分离条件,或在无低温离心机时用3000gx40秒分离条件。切不可在常温下进行高速、长时间分离,另外,在分离血浆或血清时,要避免细菌的污染。
血清的制备:用不加抗凝剂的注射器采血转入离心管中,在冰水浴中放置30分钟,4℃条件下、1000xg、10分钟进行离心分离血清。
血浆或血清分离后,若暂时不用,可在-80℃冰冻保存,并在1个月以内使用。注意为了避免吸附内毒素,请使用玻璃制试管保存。
3、抗凝剂种类及影响
在制备血浆时由于加入一定的抗凝剂,因此抗凝剂的种类和加入量对于回收率都有很大的影响,一般常用抗凝剂主要有:肝素,枸橼酸钠及EDTA等,其中以肝素的使用最多。然而,我们知道大量的肝素会对内毒素反应有干扰作用,尤其对稀释加热法和氯仿提取法将使回收率下降,而对PCA法影响较少,因此在制备血浆时肝素的加放量只需2~5μl/ml即可。