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几种血液中内毒素的前处理测定方法

发布时间: 2022-12-05  点击次数: 130次

1)氯仿提取法:测定方法如下:

 

 

(2)稀释加热法:即水稀释加热法作为简便的前处理方法被普遍采用,由于稀释倍数,加热温度和时间不同,结果也不全相同,其中主要方法见表6

 

在这些方法中由于不确定因素太多,因此值得探索的地方很多。为了克服稀释加热法的缺陷,避免浊度生成,人们开发出了使用表面活性剂(0.04% TritonX -100)稀释,805分钟加热处理方法。这个前处理方法,能得到很好的血浆内毒素回收率。减少非特异性浊度所引起的假阳性反应。尤其是日本和光纯药的Toxinonuter ET201采用比浊时间分析法检测,能得到很好的实验结果。

 

 

3)高氯酸法(PCA)与新高氯酸法(New PCA):所谓高氯酸法(PCA),即血浆加高氯酸后,产生的变性沉淀物用离心法除去,用上清液进行比色测定。后来人们又发现这些沉淀物中含有内毒素活性物质,因而对变性的血浆蛋白不进行沉淀,而进行现溶解处理,这就是新高氯酸法(New PCA),一般新高氯酸法的测定结果要比高氯酸法高8~10倍。

 

般高氯酸法只测定血中游离的内毒素,而新高氯酸法可以将游离内毒素和蛋白结合内毒素一起测定出来。也就是说,新高氯酸的测定值减去高氯酸法的测定值,就等于结型内毒素的量;我们可以同时使用两种方法检测以查明内毒与蛋白的结合情况,并且可以对病人的病情发展进行分析。具体测定方法如下所示:

 

 

另外,在我们对血浆中的内毒素和鲎试验法检测时,前处理加热对血浆中和水中内毒素影响要有一个认识。细菌内毒素在人体内的分布往往以两种方式存在,一种为游离型,另外一种为蛋白结合型。我们知道,细菌内毒素在水中存在时对加热是十分敏感的,而在血中的情况又是怎样的?人们通过实验发现:血浆中的内毒素在经过100℃加热1分钟或10分钟,其标准曲线没有出现明显的差别。而水中的内毒素经1分钟加热后,其标准曲线趋向平坦,10分钟加热后,接近水平。这可能是脂多糖分子在水中加热后出现集结的原故。而在血浆的内毒素则不同,团块的形成会受到血小板的抑制,内毒素可与多种血液成分结合,如血小板﹑抗体、粘性蛋白等,这些物质可能保护血浆内毒素与LAL发生反应。因此这就是加热血浆也不会破坏其内毒素的原因。


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