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TLR4基因:揭示其与LPS直接关联并验证为Lps基因的产物

发布时间: 2024-07-01  点击次数: 96次

最近有两个功能实验进一步证实了Tlr4基因与Lps的直接关系。Hoshino等利用基因敲除技术制备出一种TLR4缺失(TLR4-/-)小鼠,发现这种小鼠的巨噬细胞,受LPS刺激时不能产生TNFα和NO,小鼠的脾脏B细胞对LPS也无增殖反应,实验结果与C3H/HeJ小鼠的细胞相同。作者进一步将C3H/HeJ和C3H/HeN小鼠的编码TLR4跨膜区和胞浆区的基因序列(氨基酸残基623~835)与编码小鼠CD14胞外区的基因序列(氨基酸残基1~384)融合,然后连接到哺乳动物的表达载体pEF-BOS,再与NF-kB报告质粒共转染到细胞内。结果显示,LPS刺激仅能使转染有来源于C3H/HeN的CD14-TLR4的细胞激活,表现为NF-kB活性增加,不能激活转染有C3H/HeJ小鼠CD14-TLR4的细胞。

Poltorak A研究小组最近也报道,野生型TLR4蛋白在RAW 264.7巨噬细胞内过度表达可显著增强细胞对LPS的敏感性,使EC50(effective concentration)减少30倍,但过度表达C3H/HeJ小鼠TLR4的同等型蛋白TLR4Pd则使细胞对LPS的敏感性显著降低,使EC50增加2600倍,即几乎完-全抑制LPS的信号转导。上述结果进一步说明,TLR4是Lps基因的基因产物,或者说,以前提出的Lps基因与Tlr4为同一基因。因此,TLR4不仅特异性地识别LPS,而且能转导LPS的跨膜信号,在介导细胞LPS反应中发挥重要作用。

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