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三种凝胶法常用方法:试管法、玻片法及毛细吸管法的介绍

发布时间: 2022-08-09  点击次数: 148次

凝胶法常用的方法有三种,即试管法、玻片法及毛细吸管法。



  1. 试管法

将等量的被检样品与试剂加入试管,混匀放入水浴中让其充分反应然后取出观察凝胶形成的情况。实验时共需作四种试管,即试验管、阳性对照管、阴性对照管及阴性抑制对照管。


试验管取标本0.1ml+试剂0.1ml般的标本如水、注射液等,实验前不须加以处理,但血液及腹腔渗出液等实验前必须加以处理,因为在这些标本中可能会有LTLimulus test,鲎试剂法)反应的抑制物质。应用的试剂应事前以标准内毒素进行标定,并认为是可用的。


阳性对照管:标准内毒素0.1ml+试剂0.1ml。标准内毒素用前应以WHO标准品标定。所用的内毒素浓度按试剂的敏感性而定,一般为15 ng/ ml


阴性对照管:无热原水0.1ml+试剂0.1ml


抑制对照管:标本0.1ml+标准内毒素0.1ml+试剂0.2ml


上述四管均放入37℃孵育12小时观察结果。如形成凝胶坚固试管倒转180度不变形,则记为++);如混浊度和粘滞性明显增加,呈胶体状,但倾斜试管时变形,则记为+);如液体流动自如透明无变化或稍混浊有少量颗粒细絮片状物则记为-


如被检样品中有抑制物存在,则可将检品作适当的稀释或经各种处理以除去抑制物,再次测试。如这些方法无效,亦可采用其它内毒素检测法,如RTRabbit pyrogen test家兔热原实验)法。


  1. 玻片法

鉴于试管法耗费试剂量多,结果判定不易标准化,需用时间较长等缺点,Frauch1974年首先创用了玻片法。将10μl试剂与已处理过的被检样品10μl滴于无菌无热原的玻片上,充分混匀水平放置37℃30分钟,取出观察结果。如标本中含有内毒素,则混合物形成凝胶,倒转玻片时混合物不流动,触之较结实。反之则说明样本中不含内毒素或内毒素含量过低。


Goto等于1977年对此法进行了两点改进。增加试剂及样品的量,所用量各为20μl。由于Frauch法仅用10μl试剂及10μl的被检标本,量太少,且形成凝胶后其体积更小,不易判断结果。故各增加试剂及被检标本量1倍,这样结果判定更正确、容易些。②使用不含硅的玻片。由于硅玻璃组成的玻片,滴加在其上的液体可向四周扩散,而显得不规则。不含硅的玻片可使滴加在其上的液体保持稳定不向四周扩散,这样,为结果的判断提取了方便。


  1. 吸管法

此法由瑞典学者Gardi1980年首先创用。将10μl被检10μl鲎试剂滴于无菌无热原的载玻片上,充分混匀然后以毛细吸管吸入其内(一般2/3的高度),水平37℃孵育45-60分钟,取出毛细吸管浸入溴酚染料中23秒钟,取出即可判断结果。如染料能进入毛细吸管则说明样品中无内毒素或所含的内毒素量低于鲎试剂检测的敏感度记为-);如有坚固凝胶形成以致染色不能浸入,即说明样本含有内毒素,记为(+。此法敏感性高、操作简便、所需试剂少、孵育时间短结果判断较客观

我们实验室于1982-1983年间应用细吸管微量测定法对临床的多种标本进行了内毒素检测结果较为满意认为此法值得在临床上广泛推广。


目前,日本有专门的内毒素微量检测管出售,这种毛细吸管内已装有微量的冻干试剂,只需将此管插入液相标本,取出孵育一定的时间后即能判断结果。


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