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动态浊度法鲎试剂操作方法如下:

发布时间: 2022-08-09  点击次数: 336次
  动态浊度法鲎试剂是通过检测反应混合物的浊度到达某一预先设定的吸光度所需要的反应时间,或是检测浊度增加速度来检测内毒素的方法。在适宜的条件下(温度,pH值及无干扰物质),细菌内毒素激活C因子,引起一系列酶促反应,使鲎试剂产生凝集反应形成凝胶。随着凝胶的形成,反应液的吸光度(OD值,浊度)增加,OD值增加的速度与内毒素浓度成正相关。换言之,OD值上升某一预设限值(启动OD)所需要的时间(定义为启动时间)与内毒素浓度成负相关,启动时间的对数与内毒素浓度的对数成线性关系,据此,可以定量供试品的内毒素浓度。
  
 

动态浊度法鲎试剂
 

 

  动态浊度法鲎试剂操作方法如下:
  
  1、动态光度测定仪器的设定:
  
  预热仪器,设置温育温度为37℃,设置模板及程序。设定读板波长为340nm、630nm,设定动力学参数:读板90-120分钟,每读板间隔30-150s。
  
  2、内毒素标准溶液配制
  
  (1)标准曲线所采用的内毒素浓度可以为2至10倍稀释的系列(如0.5,0.25,0.125,0.0625EU/mL或10,1,0.1,0.01EU/mL))。
  
  (2)取内毒素工作标准品1支,用砂轮沿安瓿颈部划痕,开启,加入适量(建议在0.5mL-1.2mL之间)细菌内毒素检查用水,置旋涡混合器上剧烈振摇5分钟。
  
  (3)将上述内毒素溶液进一步用细菌内毒素检查用水稀释成所需浓度,每稀释一步均应在旋涡混合器上剧烈振摇1分钟。稀释的内毒素溶液静置时间超过10分钟,用前在旋涡混合器上剧烈振摇1分钟,配置时间超过4小时的内毒素溶液应丢弃。
  
  3、阴性对照为细菌内毒素检查用水。
  
  4、动态浊度法鲎试剂的溶解:按标示量加细菌内毒素检查用水于鲎试剂中,轻轻振摇使鲎试剂完全溶解。注意不要用旋涡混合器剧烈振摇。溶解的鲎试剂应在10分钟内使用。若采用多道移液器,将溶解的鲎试剂转移到除热原加样槽,并轻轻摇匀。
  
  5、实验操作:
  
  (1)取除热原微板,在各孔中分别加入100μL细菌内毒素检查用水、内毒素标准溶液,或供试品。
  
  (2)将微板放置于鲎试仪中,37℃温育10分钟。
  
  (3)温育结束,用移液器或多道移液器加入100μL鲎试剂(避免产生气泡!),中速振摇10秒混匀,在340nm波长处,每30秒(到60秒)读一次,读板120分钟。
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