细菌内毒素（脂多糖）的提取之PCP法、高压超声处理法及DMSO法的介绍

一、苯酚╱氯仿╱石油醚法（PCP）

LPS分子镶嵌于胞壁的外膜中，用某些化学试剂将胞壁裂解（如酚）后，LPS分子从破溃的胞壁中游离出来。由于LPS是一种两性分子，故它们在不同溶剂中的溶解度，*取决于该分子上的亲水/疏水性基团的多少。S-LPS有完整的亲水性О特异性侧链，所以S型LPS属亲水性分子。而R型LPS，缺乏O特异性侧链，含有完整或不完整的核心多糖和完整的类脂A，亲水度不大，而易溶于有机溶剂中，故而R-LPS用酚水法提取时所得的产量极低。

PCP法是以90%苯酚、氯仿及石油醚（40～60℃）以2：5：8所组成的单相混合提取液，这一提取方法只能将LPS及与之紧密结合的透道蛋白（Porin）提取出来，而其它成分则排除在提取液外。PCP法的水沉淀步骤仅能使LPS发生沉淀，而透道蛋白仍溶于苯酚中，故而PCP法所提取的LPS是一种较为纯化的制剂。

PCP法对制取R型细胞的LPS产量十分满意，且无核酸污染，蛋白质含量也仅在0.1～1 %间，该法温和，在室温5～20℃即可完成，制取周期较短，适用于从R_a至R_e的细菌，可成功地提取R-LPS，产量也相当高。故PCP法是研究R-LPS的有用方法。应必须注意的是在PCP法中，每一步操作均不应使用盐类，如MgCl₂、CaCl₂，否则会严重影响产量。

二、高压超声处理法

以某些物理方法（如超声波）处理菌体细胞，使其*破裂，可增加继后提取方法的*性，从而可使LPS的产率增加。Richard1983研制了一种既可提取光滑型又可提取粗糙型LPS的新方法。该方法采用了高压处理（15000Ib/in²）细菌的方法，粉碎菌细胞，继又用超声波处理，促进碎片*裂解，再以DNa s e，RNa s e处理，消化核酸。再加入蛋白酶去消化蛋白质，离心12000xg，浓缩干燥。如此制得的LPS，产量为菌体的51～81%（按测脂肪酸、庚糖和KDO值），蛋白质为0.1%、核酸1 %、脂类2～5%，纯度较高，产量比酚水法高7倍，比PCP法高2倍。

所得LPS经各种免疫化学分析，均提示用此方法提取的LPS其抗原结构完整。其不足之处是碱性条件上的加热，以前认为这一处理在于除掉蛋白质，特别是对于有些细菌（如绿脓杆菌）有用，但对别的细菌恐属多余。应当指出的一点是，碱性加热条件使类脂体A上的脂肪酸酯降解。另外一个不足之处是，此方法较为复杂，不易被一般实验室采用。

三、DMSO法

Adams介绍了一种较为简单的LPS提取方法。该法应用二甲亚砜（Dimethyl Sulfoxide，DMSO）作为主要提取试剂。以胞壁原料提制LPS。主要步骤为将预先制取的干燥胞壁以60℃DMSO提取水洗，酸化丙酮处理，冷冻干燥。DMSO法提取的LPS产量是酚水法的10倍，但蛋白质含量很高（45%） 。