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细菌内毒素(脂多糖)的的纯化

发布时间: 2022-09-13  点击次数: 70次

脂多糖Lipopoly saccharideLPS是革兰氏阴性细菌细胞壁中的一种成分,脂多糖对宿主是有毒性的。脂多糖只有当细菌死亡溶解或用人工方法破坏菌细胞后才释放出来,所以叫做内毒素

 

三氯醋酸法(Trichloroacetic AcidTCA)、酚水法苯酚╱氯仿╱石油醚法PCP)、DMSO高压超声处理法所提取的LPS或多或少受到蛋白质、核酸及多糖的污染,故需作一定的纯化。LPS的纯化方法目前最-常用的为超速离心(4万转×4小时,共三次),在这一条件下,LPS可沉淀下去,而蛋白质、核酸及多糖则保留在上清液中,去除上清液即可得到较为纯化的LPS

 

 

但是这一方法需时较长,且质量过关的超速离心机目前在国内亦不十分普及,故而难以推广应用。我们在实际工作中体会到,用任何方法提取的LPS,可再以PCP纯化一次(140ml/g LPS,然后只需一次超离,即可取得高度纯化的LPS

 

提取的LPS除可被蛋白质、核酸及多糖污染外,还可被一些小分子物质,如多胺、阳离子Ca++Mg++K+的污染。通过电透析可将这类小分子物质除去。此时形成的LPS为酸性LPS(由LPS中类脂A上的磷酸基团形成的)。应用碱中和LPS,可变成LPS的盐。如用NaOH中和则可变成LPS钠盐而应用三乙基乙胺则可变成LPS三乙胺盐、后者极易溶解于水,已广泛地应用于生物学研究。

 

综上所述,LPS取方法较多,应当根据菌种和实验条件而选用合适方法。PCP法对R型菌尤显长处高压超声法虽可用于SR但方法步骤繁杂DMSO法与TCA法已很少用到而酚水法无论产量,纯度及物理性质均较满意的,不失为一个实用的方法。LPS纯化目前一般采用PCP法及一次超速离心,应用该法可使LPS污染物包括蛋白质、核酸及多糖除去,而应用片透析方法则可除去LPS中的小分子物质如多胺、二价阳离子,从而可得LPS转化成实验需要的盐类。

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