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关于鲎试验法中假阳性结果的解决方法

发布时间: 2022-11-11  点击次数: 107次

样品中混入细菌内毒素发生凝集,由形成凝胶的有无来检测样品中的内毒素然而试剂除了内毒素反应外它同时也会对内毒素以外的其他物质存在凝集反应。因此势必会形成假阳性或假阴性的实验结果。这就是试验法中的特异性问题。

 

对于假阳性结果的问题可以说十分复杂。因为对于大多数样品来说主要都为假阴性情况较多而对于假阳性结果的判断和排除是很困难的。当我们对一个样品用试验法检测出阳性结果时一可以说是由于内毒素超过限值所引起二也可以理解为假阳性结果。因此我们在实验时要特别注意区分。

 

 

在假阳性结果的研究过程中最-突出的是有关G因子反应系被激活所形成的凝胶化反应,即一般的试剂由于含有G因子也可被1,3-β-D-glucan葡聚糖所激活而使产生凝集反应从而形成假阳性结果。

关于1,3-β-D-glucan它是在1981年由Adinuma所发现一种抗癌药能使试剂产生凝固。国外报道该物质在10ng/ml时就可使试剂凝固。根据我们的试验发现不同厂家的试剂可在2.5 ~10ng/ml范围内使试剂凝固。该物质广泛存在于担子菌、真菌、地衣类、酵母和藻类的菌体成分中。另外某些用人造纤维造的人工肾透析膜上也含有类似物质它可引起家兔升温。

 

1,3-β-D-glucan对热极为稳定。高压121℃并不能使其灭活。需2502小时加热灭菌才能使其灭活。因此要想防止假阳性结果的产生必须要排除1,3-β-D-glucan,使其不能激活G因子而形成凝胶。

国外在80年代后对此进行了许多的研究和改进。目前已开发出仅对内毒素起反应的专试剂。只与内毒素起反应的试剂有日本生化学工业株式会社生产的Endospecy它是将东方裂解液中各组分提取后重组,重组时不加G因子,另一种是日本和光纯药株式会社生产的ES =它是美洲裂解液中加大刃羧甲基curdaln封闭G因子。同时国外也开发出只与1,3-β-D-glucan起反应的试剂由蚕中提取而来的新型的SLP试剂。和光以及日本化学工业株式会社生产的Gluspecy

 

对于大多数样品来说,由于使用特异性试剂与非特异性试剂对其结果是没有差异的。因此在一般情况下可以不必考虑只有在确实认定有干扰时才考虑使用特异性试剂以排除干扰。

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