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血液中细菌内毒素常用测定方法

发布时间: 2022-11-29  点击次数: 140次

1968年自LevinBang发现并建立鲎试验方法以来,就逐渐得到临床及药检部门的重视和研究。尤其是在临床检验方面的应用更是飞速发展。在鲎试验法建立的初期,Levin就使用该法用于测定病人血浆中的内毒素,之后其应用范围也越来越广。随着科学技术的不断进步发展,鲎试验方法的研究也逐渐完善,从最初的定性凝胶法逐渐向灵敏度更高的微量定量方面发展,因此使血液中内毒素测定变得更加快速、准确,更加适用于临床各种内毒素感染症状的诊断。


 

目前,在日本国内,以合成基质法为中心的血浆中的内毒素含量测定研究进行得比较深入,而且也是近年来文献报道最多的,据说在此领域日本的研究工作一直处于世界前列。加之测定仪器以及专用TAL试剂不断完善,使测定方法方面也越来越方便简单。同时用于血浆内毒素测定试剂在日本已形成商品化,并获得厚生省批准。

 

我国在70年代开始就已经使用TAL试剂检测病人血浆中的内毒素研究,但由于检测方法及TAL试剂的开发缓慢,目前在临床上的应用还很少,同国外间差距还很大。下面就血浆中内毒素测定等方面内容作一简要介绍,同时希望国内能在这一领域的研究和应用尽快赶上国际发展水平,以提高我们内毒素研究和检测水准。

 

国外常用测定方法

 

作为机体中细菌内毒素测定,除了肾上腺素皮肤试验外,还主要有发育鸡卵试验,Pertusis treated mouse test platelet agglutination rat Lethalitytest等的bioassay方法,然而这些方法普通检出灵敏度低,特异性差,实用性不大。自鲎试验法建立以来,由于检出灵敏度高,特异性强,简便实用,是目前普遍采 用的一种分析手段。作为血液,由于成分组成比较复杂,同时含有许多干扰鲎试验反应的物质(如各种蛋白酶抑制剂,内毒素结合蛋白等),因此分离这些干扰物质即血液前处理工作是极为重要的。目前除去血液中的干扰因子(inhibiter) 的前处理方法主要有:血清稀释法,pH变动法,氯仿提取法、PCA法等。而用于检测人体中内毒素测定法主要为鲎试验法中的凝胶法,比浊比色法、免疫测定等方法。其测定原理如下所示:  

 

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随着分析手段的不断进步,目前定性的凝胶法已很少使用,相比微量定量的动态浊度法(kinetic turbimetric Assay)终点比色法以及动态比色法的使用率逐年上升。尤其在日本临床普遍采用动态比色法的分析手段,而且已逐渐发展到全血的微量定量。

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